Comparación de tres métodos moleculares para el análisis de procariontes ambientales en el mar del canal de Yucatán, México

Laura Espinosa-Asuar, Ana E. Escalante, Luisa I. Falcón, Germán Bonilla-Rosso, Santiago Ramírez-Barahona, Luis E. Eguiarte, Valeria Souza

Resumen


En este trabajo describimos la comunidad procarionte de una muestra de agua marina del canal de Yucatán. Para la determinación de la diversidad microbiana se usaron tres métodos moleculares: 1) T-RFLPs. 2) Secuenciación de amplicones (bibliotecas de clones). 3) Secuenciación shotgun de un metagenoma. Como un segundo objetivo, se presenta una comparación de los alcances y los límites de cada uno de estos tres métodos. Para esta comparación, se tomaron en cuenta tres criterios: el número de unidades taxonómicas detectadas, la precisión en la asignación taxonómica y el costo del estudio. Los taxa más abundantes fueron Candidatus Portiera OTU 3744 (equivalente al clado SAR86) y Candidatus Pelagibacter. Los resultados mostraron que la estrategia de secuenciación shotgun de ADN es la más poderosa en términos de unidades taxonómicas detectadas, mientras que los datos que se obtuvieron por T-RFLPs y con la biblioteca de clones, representan sólo una submuestra de la biblioteca de fragmentos generados mediante shotgun. En cuanto a resolución filogenética (determinación taxonómica), la aproximación más precisa fue la secuenciación de bibliotecas de clones. Los costos de las tres estrategias varían considerablemente, pero sus alcances también lo hacen. Por lo tanto, es importante tomar en consideración que algunas preguntas ecológicas y evolutivas sólo pueden ser contestadas específicamente por una u otra metodología.

Palabras clave


Clonación; diversidad procarionte; NGS; shotgun; T-RFLPs

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